Korelace genotypu, fenotypu a hladiny mRNA u vybraných nervosvalových poruch

Molekulárně genetická analýza byla provedena u pacientů s diagnózou Duchennovy/Beckerovy svalové dystrofie (DMD) a pletencové svalové dystrofie typu 2A (LGMD2A). DMD je spojena s mutacemi v genu pro dystrofin, LGMD2A s mutacemi v genu pro kalpain-3. Výsledky molekulárně genetické analýzy byly porovnány s výsledky imunohistochemické analýzy proteinů ve svalové tkáni a s klinickými projevy pacienta.

Metody. Molekulárně genetická analýza mRNA a DNA genu DMD a CAPN3 metodami reverzní transkripce, amplifikace, PTT (Protein Truncation Test) a sekvenční analýzy DNA; u pacientů s geneticky potvrzenou diagnózou DMD/BMD nebo LGMD2A analýza hladiny mRNA genu pro dystrofin resp. kalpain-3 metodou real-time PCR a vyhodnocení komparativní metodou pro relativní kvantifikaci.

Výsledky. Bylo potvrzeno, že nalezený genotyp souvisí s klinickými projevy onemocnění, tzn., že mutace měnící čtecí rámec translace jsou spojeny s podstatně závažnějším průběhem choroby. V případě DMD/BMD byli nalezeni pacienti, u kterých genetická analýza odhalila mutaci měnící čtecí rámec translace, ale výsledný fenotypový projev byl mírnější, než by odpovídalo nalezené mutaci. U těchto případů byly v souvislosti s detekovanou mutací nalezeny alternativní sestřihy mRNA, které způsobily obnovení čtecího rámce, popř. předpokládáme, že došlo k iniciaci nového počátku translace. Podobně jako klinické projevy i výsledky imunohistochemické analýzy u těchto pacientů odpovídaly mírnější formě nemoci, tj., byly detekovány úsekovité výpadky popř. oslabení dystrofinu. Výsledky genetické a imunohistochemické analýzy byly korelovány s hladinou mRNA sledovaných genů. Bylo zjištěno, že výsledná hladina mRNA souvisí s typem detekované mutace, tj., že transkripty s mutací vytvářející předčasný terminační kodon jsou degradovány mechanismem nonsensemediated mRNA decay.

Práce byla podporována grantem IGA MZ ČR 1A/8608-4.