Intronové mutace jako příčina hemofilie A

U malé skupiny pacientů s typickým obrazem hemofilie A (HA) není  možné nalézt kauzální mutaci v kódující sekvenci pro faktor VIII (FVIII). Vědci z německého Bonnu studovali skupinu pacientů s mírnou HA (a pouze s jedním případem středně závažné HA), u kterých nebyla  detekovatelná mutace ve FVIII.

U těchto pacientů stanovili  aktivitu FVIII a von Willebrandova faktoru (VWF), provedli eseje na  stanovení vazby VWF-FVIII (VWF:FVIIIB) a vazby VWF-kolagen (VWF:CB), dále analyzovali VWF multimery. Současně byl kompletně sekvenován gen  pro VWF k vyloučení mutace. Lokus pro FVIII zahrnující introny byl  sekvenován pomocí long-range PCR (LR-PCR) v kombinaci s přístupem  sekvenování nové generace (NGS). Dalším krokem pak byla analýza mRNA  FVIII kvantitativní i kvalitativní s využitím PCR v reálném čase (qRT-PCR) a PCR s reverzními transkriptázami (RT-PCR).

Všechny  testy na VWF byly normální. LR-PCR metoda ukázala integritu lokusu  FVIII. Pro každého pacienta byl prokázán unikátní polymorfismus, s výjimkou dvou, které se opakovaly. Analýza s RT-PCR potvrdila, že dvě  z nalezených variant byly spojeny s vytvořením nových míst sestřihu, které byly příčinou vložení intronových DNA sekvencí do mRNA a vytvořily tak nové předčasné stop kodóny.

Tento přístup k hledání mutací ve FVIII ukázal, že některé intronové mutace v genu pro FVIII mohou vzácně působit abnormální tvorbu mRNA, což může být příčinou obrazu mírné HA.

(eza)

Zdroj: Pezeshkpoor B., et al. Deep intronic ‚mutations‘ cause hemophilia A: Application of Next Generation Sequencing in patients without detectable mutation in F8 cDNA. J Thromb Haemost. –⁠ publikováno online 29. června 2013; doi: 10.1111/jth.12339.