Využití multiplex PCR metody pro rychlou diagnostiku BCG infekce u dětí

Laboratorní metody používané rutinně pro diagnostiku mykobakteriálních infekcí dokáží rozlišit narostlou kulturu Mycobacterium tuberculosis a Mycobacterium bovis BCG, ale vyšetření trvá minimálně 3 týdny a ne vždy je kultivace z klinického materiálu úspěšná. V tomto článku je popsána metoda multiplex polymerázová řetězová reakce (PCR), která umožňuje rychlé rozlišení vakcinačního kmene BCG od ostatních mykobakteriálních druhů komplexu Mycobacterium tuberculosis nejen z narostlé kultury, ale i přímo z klinického materiálu. Pro odlišení se využívá charakteristická delece oblasti RDl v BCG genomu.Metoda byla zavedena a optimalizována pomocí 12 známých mykobakteriálních kmenů. Metoda multiplex PCR se využívá od roku 1999 v diferenciální diagnostice u dětí s podezřením na postvakcinační komplikace. Od roku 1999 do června 2001 bylo vyšetřeno 18 biologických materiálů.Multiplex PCR se osvědčila jako rychlá, jednoduchá, citlivá a specifická metoda pro odlišení BCG vakcinačních kmenů.

Klíčová slova:
Mycobacterium bovis BCG, Mycobacterium tuberculosis komplex, multiplex PCR, postvakcinační komplikace

Use of the Multiplex PCR Method for Rapid Diagnosis of BCG Investigation Children

The Bacillus Cahnette-Guérin (BCG) vaccine strain can be differentiated from other members of the Mycobacterium tuberculosis complex by conventional methods but it is time consuming. Therefore, the ability to rapidly and specifically identify BCG is clinically important.In this paper authors describe multiplex PCR (polymerace chain reaction) based methods for rapid identification of Mycobacterium bovis BCG infection. A characteristic of BCG strains is deletion of the genomic region RDl. Detection of this form is the basis of a multiplex PCR assay to distinguish between Mycobacterium tuberculosis (TB) and non-pathogenic Mycobacterium bovis BCG.PCR conditions esere optimised by testing 12 known strains. A multiplex PCR assay is used in the differential diagnosis of complications after BCG vaccination in newborns from 1999. Authors tested 18 clinical samples from 1999 till July 2001.Thus, the assay affords a rapid, simple and effective method for the discrimination of the BCG vaccine strain and other members of the M. tuberculosis complex.

Key words:
Mycobacterium bovis BCG, Mycobacterium tuberculosis complex, multiplex PCR, postvaccination complications

Autoři: L. Plíšková ¹; K. Hrochová ¹; Lenka Ryšková ² ; J. Lesná ²; V. Palička ¹
Působiště autorů: klinické biochemie a diagnostiky Fakultní nemocnice, Hradec Králové, přednosta prof. MUDr. V. Palička, CSc. Ústav klinické mikrobiologie LF UK, Hradec Králové, 2 přednostaprof. MUDr. J. Horáček, CSc.
Vyšlo v časopise: Čes-slov Pediat 2002; (9): 503-506.
Kategorie: Články